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葡聚糖凝膠 G25
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JD200401134607 葡聚糖凝膠 G25 -- -- 0元 咨詢客服 3天
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性狀: 葡聚糖凝膠G25是葡聚糖基凝膠過濾層析介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了天然多糖化合物極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),與生物活性大分子有很好的相容性,具有高離子交換容量,無非特異性吸附,快流速操作等特點,廣泛用于大分子蛋白、超螺旋DNA、病毒純化等生物大分子的分離純化,脫鹽。
凝膠層析(gel chromatography)又稱分子篩過濾、排阻層析。凝膠是一種多孔性的不帶表面電荷的物質(zhì),當(dāng)帶有多種成分的樣品溶液在凝膠內(nèi)運動時,由于它們的分子量不同而表現(xiàn)出速度的快慢,在緩沖液洗脫時,分子量大的物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi),在凝膠間幾乎是垂直的向下運動,而分子量小的物質(zhì)則進(jìn)入凝膠孔內(nèi)進(jìn)行“繞道”運行,這樣就可以按分子量的大小,先后流出凝膠柱,達(dá)到分離的目的。凝膠層析可用于脫鹽、分離提純、測定高分子物質(zhì)的分子量、高分子溶液的濃縮等,具有設(shè)備簡單,操作方便,分離迅速及不影響分子生物學(xué)活性等優(yōu)點。
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn): 1. 溶脹
  取所需干膠,用5倍去離子水溶脹,2小時后待用。
  2. 裝柱
  2.1 凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液;可選中性附近的Tris-鹽酸、PBS緩沖液。
  2.2 將所取凝膠抽干,用初始緩沖液(按凝膠∶緩沖液=3∶1的比例)配成勻漿并脫氣。
  2.3 將層析柱垂直固定,底端用水或緩沖液潤濕并保持一段液位。
  2.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,水封層析柱,沉降過夜。
  2.5 連結(jié)好柱子頂端活動柱頭,打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時操作流速流過5柱體積,再使用1.5倍的操作流速流過5柱體積,調(diào)節(jié)適配柱頭,使其盡量貼近膠面,最后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
  注意:凝膠過濾介質(zhì)的使用對裝柱的要求較高,裝柱效果可用丙酮-水溶液進(jìn)行等板高度的檢驗。所有操作過程不能引入氣泡,保證裝膠的均勻度。
  3. 平衡
  將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱,觀察檢測器的變化,直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。
  4. 上樣
  切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣,上樣量應(yīng)盡可能減??;樣品的預(yù)處理:除鹽,平衡液配制,0.45mm微孔濾膜過濾。
  5. 洗脫
  用緩沖液洗脫,保持流速不變。
  6. 再生
  用高鹽濃度的緩沖液(含1-2mol/LNaCl)按操作流速沖洗3-5個柱體積,接著用平衡液洗到平衡3-5個柱體積。