4007787550
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| 貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 包裝 | 單價(jià) | 貨期 | 庫(kù)存 |
| JD200401115031 | 辛巴藍(lán)-瓊脂糖凝膠 | -- | -- | 0元 | 咨詢客服 | 3天 |
| 性狀： | 辛巴藍(lán)-瓊脂糖凝膠FF是一種將活性藍(lán)色染料辛巴藍(lán)（Cibacron Blue F3GA）鍵合在瓊脂糖微球上形成的染料親和層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了天然多糖化合物極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有高動(dòng)態(tài)吸附容量，快流速操作等特點(diǎn)，主要用于各種以NADH或NADPH做輔酶的酶類（如脫氫酶）、血清白蛋白、干擾素、凝血酶、凝血因子等蛋白質(zhì)和多肽的分離純化。 親和層析（affinity chromatography）是一種吸附層析，配體（或配基）和相應(yīng)的配基（或配體）發(fā)生特異性結(jié)合，而這種結(jié)合在一定的條件下又是可逆的。所以將配體（或配基）固相化后，就可以使存在液相中的相應(yīng)配基（或配體）選擇性地結(jié)合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開(kāi)，達(dá)到分離提純的目的。親和層析具有高效、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。 |
| 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)： | 1. 裝柱 1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。 1.2 將所取凝膠抽干，用初始緩沖液（按凝膠∶緩沖液=3∶1的比例）配成勻漿并脫氣。 1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。 1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，水封層析柱，沉降過(guò)夜。 1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過(guò)5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過(guò)5柱體積，調(diào)節(jié)適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。 注意：所有操作過(guò)程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。 2. 平衡 將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。平衡緩沖液根據(jù)目標(biāo)物性質(zhì)和pH要求可選擇Tris-鹽酸、PBS、檸檬酸-檸檬酸鈉、巴比妥、醋酸-醋酸鈉等緩沖液。 3. 上樣 切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣，上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可進(jìn)行線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量；樣品的預(yù)處理：用平衡液配制，0.45mm微孔濾膜過(guò)濾。 4. 沖洗 用2-3個(gè)柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變，此時(shí)未吸附的組分被清洗出去。 5.洗脫 辛巴藍(lán)-瓊脂糖凝膠FF的洗脫可用鹽溶液進(jìn)行恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫，一般推薦增大鹽濃度的梯度洗脫進(jìn)行。 6. 再生 用高鹽濃度的緩沖液（含1-2mol/LNaCl）按操作流速?zèng)_洗3-5個(gè)柱體積，接著用平衡液洗到平衡3-5個(gè)柱體積。 若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。 7. 在位清洗(CIP) 對(duì)于強(qiáng)結(jié)合蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)，可采用以下流程進(jìn)行在位清洗：1mol/LNaOH洗2個(gè)柱體積，4mol/L尿素或3mol/L鹽酸胍洗2個(gè)柱體積，70%乙醇或30%異丙醇洗2個(gè)柱體積，平衡緩沖液洗2個(gè)柱體積。 在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，同時(shí)介質(zhì)上的熱源也可基本去除。 |
