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         Pfu DNA Ploymerase是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase基因的大腸桿菌中表達(dá)并經(jīng)過(guò)柱純化分離出來(lái)的重組蛋白，其分子量為90kD。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能糾正DNA擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的錯(cuò)配，而傳統(tǒng)的Taq酶卻不能，其它耐熱DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等雖具有校正功能，但Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱DNA Polymerase中出錯(cuò)率最低的。Pfu酶無(wú)5’→3’核酸外切酶活性，PCR反應(yīng)中的延伸速度一般為0.5-1kb/min，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好，95℃ 1小時(shí)仍保持90%以上的活性，對(duì)于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu酶的PCR產(chǎn)物為平末端，可加A處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。

活性定義：

         1單位(U) Pfu DNA Polymerase活力定義為在74℃，30分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚(yú)精子DNA作為模板/引物，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

質(zhì)量控制：

         SDS-PAGE檢測(cè)Pfu DNA Polymerase純度大于99%；經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性；PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA；能有效地?cái)U(kuò)增人類基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無(wú)明顯活性改變。

酶貯存緩沖液：

         50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol；其他成份。

適用范圍：

         用于DNA的高保真擴(kuò)增，如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變的分析（SNP）和末端補(bǔ)平等。

注意事項(xiàng)：

1、PCR反應(yīng)體系加樣時(shí)，最后一步加入Pfu DNA Ploymerase，整個(gè)過(guò)程宜在冰上操作。

2、取Pfu DNA Ploymerase做PCR反應(yīng)時(shí)，請(qǐng)用高壓滅菌處理過(guò)的吸頭。

3、10×Pfu Buffer中含20 mM Mg2+，如PCR反應(yīng)需要較高M(jìn)g2+濃度，請(qǐng)另行加入。

4、 用Pfu酶擴(kuò)增時(shí)，引物的純度要求較高，引物長(zhǎng)度大于18個(gè)堿基，Tm值在55-80℃之間，引物濃度在0.1-0.5uM之間，比Taq酶略高。